• 中国工程院院士
杨宝峰
杨宝峰_会议论文_中国工程院院士馆
会议论文

微小RNA——心血管疾病药物研发新靶点

会议名称: 2013年中国药学大会暨第十三届中国药师周  
会议时间: 2013年11月02日 会议地点:
简 介:
心肌纤维化是心肌重构的重要环节,普遍存在于心肌梗死、慢性充血性心力衰竭等心脏疾病中。明确其发病机制,对于预防和治疗不同类型心脏疾病均有重大意义。本研究应用特异性miRNA转基因小鼠模型,通过功能获得与功能缺失等方法研究miRNA在心脏疾病中的作用。我们发现野生型小鼠心脏左冠状动脉结扎后心肌发生纤维化,其梗死边缘区miRNA表达量异常增高。心脏特异性过表达该miRNA的小鼠,其心肌发生间质纤维化,进而发展为扩张型心肌病和心力衰竭。相反,心脏特异性敲除该miRNA

MicroRNA-133与Calcineurin的相互平衡调控心肌肥厚的发生

会议名称: 第七届海峡两岸心血管科学研讨会  
会议时间: 2009年08月14日 会议地点: 哈尔滨
简 介:
目的:心肌肥厚是心脏在多种病理刺激下发生的结构重构过程。研究表明calcineurin/NFAT通路和microRNA-133(miR-133)在心肌肥厚过程中发挥关键作用。在肥厚心肌中,calcineurin的表达和活性增加而miR-133的表达下降;抑制calcineurin或增加miR-133的表达可以拮抗心肌肥厚的发生。因此本文目的是研究心肌肥厚过程中MiR-133与calcineurin的相互作用。方法:采用胸主动脉缩窄法建立小鼠体内压力负荷型心肌肥厚模型;苯肾上腺素孵育建立体外培养乳鼠心肌细胞肥厚模型;Real-time PCR法定量测定mRNA。结果:荧光素酶检测法显示,HEK293细胞转染miR-133下调calcineurin的表达,共转染miR-133和miR-133特异反义寡核苷酸(AMO-133)抑制miR-133下调calcineurin的作用。在培养的乳鼠心肌细胞中也获得同样的结果。体内、外心肌肥厚模型均表现miR-133的表达下降和calcineurin的活性增高。给予calcineurin抑制剂环孢素A可抑制体内、外心肌肥厚模型中miR-133表达的下降。NFAT是一种转录因子,也是calcineurin通路的下游信号。NFAT的诱骗寡核苷酸(NFAT-decoy)剂量依赖性增加培养的乳鼠心肌细胞中miR-133的表达。结论:miR-133或calcineurin通过彼此相互抑制的方式,正反馈调节自身表达;心肌肥厚的发生发展依赖于MiR-133与calcineurin相互作用的结果。

microRNAs:调控心肌细胞凋亡及诱发恶性心律失常导致心源性猝死的重要调质

会议名称: 第七届海峡两岸心血管科学研讨会  
会议时间: 2009年08月14日 会议地点: 哈尔滨
简 介:
目的:研究微小RNA(microRNA,miRNA)是否参与心肌细胞凋亡及缺血性心脏疾病的病理生理过程,探讨其机制并寻找新的抗心律失常药物作用靶点。方法:采用H_2O_2诱导心肌细胞凋亡模型,结扎诱发大鼠缺血性心律失常模型及临床取得的人类冠心病心肌组织,实时定量RT-PCR检测miRNA在病理情况下表达水平的变化;基因转染技术将miRNA及其反义核苷酸AMO转入细胞,观察心功能;膜片钳技术测定IK1电流,多通道计算机数据采集系统记录电信号传导。结果:miR-1和miR-133对氧化应激导致H9C2细胞(鼠心室肌细胞)凋亡产生相反的作用,miR-1有促进凋亡作用,而miR-133有抑制凋亡作用。在氧化应激中miR-1的水平显著上升,我们证实miR-1作用于HSP60,HSP70基因3'非翻译区(3'UTR)的单独位点;而miR-133

microRNAs在尼古丁诱导犬心房重构中的作用研究

会议名称: 第七届海峡两岸心血管科学研讨会  
会议时间: 2009年08月14日 会议地点: 哈尔滨
简 介:
目的:尼古丁(nicotine)是烟草的主要成分之一,随着吸烟吸收进入循环系统,有研究报道吸烟人群中心律失常、尤其是心房颤动(atrial fibrillation AF)的发生率明显增加,但到目前为止,尼古丁诱导心房纤维化并最终发生房颤的机制仍不清楚。本研究目的是探索尼古丁诱发房颤时microRNAs的变化,并深入探讨尼古丁促房颤的分子机制。方法:杂种犬随机分为对照组、尼古丁高、低剂量处理组,尼古丁组实验动物连续30 d给予不同剂量的尼古丁后,应用心房快速起搏观察房颤发生率及房颤持续时间,并应用实时定量PCR技术检测microRNAs水平的变化;Western Blot技术测定转化生长因子beta1(transforming growth factor-beta1 TGF-beta1)、TGF-betaⅡ型受体(TGF-betaRⅡ)的蛋白表达变化。结果:连续应用尼古丁30 d后,犬房颤的易感性显著增加,是正常对照犬的8~15倍,房颤持续时间亦显著延长,并表现为明显的剂量依赖性;病理学研究结果表明,应用尼古丁导致犬心房组织中胶原沉积;应用实时定量PCR技术研究发现应用尼古丁处理的犬心房成纤维细胞microRNAs,miR-133和miR-590表达量明显下降,在体水平检测结果一致。经研究发现,TGF-beta1基因的3'-UTR区有多个miR-133结合位点,而TGF-betaⅡ型受体基因的3'-UTR区有多个miR-590结合位点,说明它们分别是miR-133和miR-590的靶基因,蛋白印迹研究表明,在体、离体给予尼古丁均导致犬心房组织中TGF-beta1和TGF-betaRⅡ明显升高;应用分离培养的犬心房成纤维细胞,采用在体基因转染技术研究发现,转染miR-133组成纤维细胞TGF-beta1蛋白表达水平上调,而转染miR-590组成纤维细胞TGF-betaRⅡ蛋白表达水平上调,相应的反义抑制剂(AMOs)能分别对抗其作用。结论:吸烟或暴露于尼古丁会通过某种机制导致microRNAs,miR-133和miR-590水平下调,通过转录后抑制导致TGF-beta1和TGF-betaRⅡ蛋白表达水平明显升高,可能是尼古丁增加心房胶原沉积、心房发生纤维化,最终增加房颤易感性的分子机制之一。
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